Mục đích của việc tinh chế sản phẩm PCR là gì?

2024 Tác giả: Miles Stephen | [email protected]. Sửa đổi lần cuối: 2023-12-15 23:42

Thanh lọc DNA từ một PCR phản ứng thường cần thiết cho việc sử dụng hạ nguồn, và tạo điều kiện thuận lợi cho việc loại bỏ các enzym, nucleotide, mồi và các thành phần đệm. Theo truyền thống, điều này được thực hiện bằng cách sử dụng các phương pháp chiết xuất hữu cơ, chẳng hạn như chiết xuất phenol cloroform, sau đó là kết tủa bằng etanol.

Một câu hỏi cũng được đặt ra là, tại sao cần phải tinh chế các sản phẩm PCR?

Bạn cần phải tinh chế các sản phẩm PCR loại bỏ các đoạn mồi, nucleotide và enzyme không sử dụng để tối ưu hóa sự thành công của quá trình thắt, điều này sẽ duy trì và trình tự các sản phẩm của PCR . Đến thanh lọc NS Sản phẩm PCR , sắc ký loại trừ kích thước được sử dụng.

Ngoài ra, tôi nên làm gì sau PCR? Để tối đa hóa khả năng phục hồi, tráng cốc thụt rửa hai lần với 10 đến 20 µL TE hoặc nước. Trận chung kết PCR phản ứng có thể chứa tới một microgram DNA được khuếch đại có thể được sử dụng cho nhiều ứng dụng sinh học phân tử. Các ứng dụng này có thể ít nhiều nhạy cảm với các thành phần còn lại của PCR hỗn hợp phản ứng.

Người ta cũng có thể hỏi, làm thế nào để bạn làm sạch các sản phẩm PCR?

Các phương pháp cổ điển được sử dụng để dọn dẹp hướng lên Sản phẩm PCR trước khi giải trình tự bao gồm điện di gel, kết tủa etanol và sắc ký cột. Mặc dù khá hiệu quả, nhưng các phương pháp này có thể nhanh chóng trở nên cồng kềnh khi xử lý nhiều mẫu song song và thể hiện mức độ mất mẫu khác nhau.

Tại sao DNA phải được làm sạch?

chúng tôi dọn dẹp hướng lên DNA từ dung dịch nước để loại bỏ muối đệm, enzym hoặc các chất khác có thể ảnh hưởng đến các ứng dụng hạ lưu. Ví dụ bao gồm phản ứng PCR dọn dẹp hướng lên, dọn dẹp tăng lên sau khi tiêu hóa hạn chế và dọn dẹp lên của bộ gen hoặc plasmid DNA bị ô nhiễm với protein / mảnh vụn tế bào.