Có những phương pháp nào khác để tinh chế các sản phẩm PCR?

2024 Tác giả: Miles Stephen | [email protected]. Sửa đổi lần cuối: 2023-12-15 23:42

Đối với những ứng dụng yêu cầu PCR dọn dẹp hoặc xác nhận PCR kết quả, ở đó là hai phương pháp thường theo sau: Sản phẩm PCR cô lập bằng cách sử dụng cột và gel thanh lọc từ gel agarose.

Sau đây, loại sắc ký nào được sử dụng để tinh chế các sản phẩm PCR?

Để tinh sạch các sản phẩm PCR, sắc ký loại trừ kích thước được sử dụng. Điều này bẫy các phân tử nhỏ như protein, mồi , và các nucleotide trong khi các phân tử lớn như sản phẩm PCR quá lớn để đi vào các hạt và đi qua cột vào các ống thu nhận.

Ngoài ra, làm thế nào để bạn tinh chế DNA? Về cơ bản, bạn có thể thanh lọc của bạn DNA mẫu bằng cách ly giải các mẫu tế bào và / hoặc mô của bạn bằng cách sử dụng quy trình thích hợp nhất (phá vỡ cơ học, xử lý hóa học hoặc phân hủy bằng enzym), cô lập axit nucleic khỏi các chất gây ô nhiễm và kết tủa nó trong dung dịch đệm thích hợp.

Ngoài ra, tại sao chúng tôi tinh chế sản phẩm PCR?

Thanh lọc DNA từ một PCR phản ứng thường cần thiết cho việc sử dụng hạ nguồn, và tạo điều kiện thuận lợi cho việc loại bỏ các enzym, nucleotide, mồi và các thành phần đệm. Các phương pháp thường được sử dụng sử dụng các cột spin chứa chất nền silica mà DNA có thể được liên kết một cách chọn lọc khi có mặt các muối chaotropic.

Tại sao DNA phải được làm sạch?

chúng tôi dọn dẹp hướng lên DNA từ dung dịch nước để loại bỏ muối đệm, enzym hoặc các chất khác có thể ảnh hưởng đến các ứng dụng hạ lưu. Ví dụ bao gồm phản ứng PCR dọn dẹp hướng lên, dọn dẹp tăng lên sau khi tiêu hóa hạn chế và dọn dẹp lên của bộ gen hoặc plasmid DNA bị ô nhiễm với protein / mảnh vụn tế bào.